Sources :
Titre de l'article : Mycology Lab Skills: Plates, Slants, & Liquid Culture
Lien de l'article : https://northspore.com/blogs/the-black-trumpet/lab-skills-plates-slants-liquid-culture
Publication : Will Broussard le 12/01/2024 pour NorthSpore
Dans cette leçon en laboratoire de mycologie, notre mycologue, Alexia Kumer, montre comment produire des milieux de croissance pour la culture des champignons en utilisant des plaques de gélose. En utilisant des techniques simples à la maison, vous pourrez faire des “boîtes de Pétri” pour vos champignons comestibles et médicinaux préférés. Et bien que nous ayons travaillé dans des locaux stériles pour créer cette leçon, ces mêmes techniques peuvent être adaptées à un cadre domestique en utilisant un espace de travail propre comme dans notre SAB, que nous vendons sur notre site.
“Dans le monde naturel hautement compétitif, les chances que les spores de champignons germent et produisent ensuite un champignon sont minces. Au sein d’un laboratoire, isolé de la contamination atmosphérique, la probabilité de succès est bien meilleure. Ce qu’un cultivateur fait, c’est retirer une espèce sélectionnée de la féroce compétition de l’extérieur pour la placer dans un environnement optimisé à l’intérieur où le mycélium de champignon pousse sans entrave aux ravages de la nature. Ce havre de refuge tranquille est, en effet, le laboratoire stérile.”
–Paul Stamets, “A Simplified Overview of Mushroom Cultivation Strategies”
Remarque : Si vous ne souhaitez pas produire votre propre milieu, vous pouvez acheter des plaques de gélose et des inclinaisons prémélangées en cliquant sur les liens ci-dessous.
https://lejardinmycelia.com/products/boites-de-petri-60mm-avec-agar-agar-mya
Les plaques sont la surface de travail pour travailler avec les champignons. Elles vous permettent d’observer les schémas de croissance, les vitesses de colonisation et vous donnent l’occasion de séparer différentes souches de mycélium isolées des spores d’un seul champignon. Les plaques sont utiles pour cloner des souches de champignons sauvages, isoler des spécimens des contaminants et mener des essais de croisement entre différentes souches de champignons. Les plaques contiennent un milieu de culture solide composé de sucres naturels et d’agar, une substance gélatineuse dérivée d’algues rouges qui donne au mycélium un ancrage pendant que nous faisons notre travail.
Pour les plaques, nous utiliserons le milieu de culture MYA, abréviation de “malt, levure, agar”. Dans le MYA, l’extrait de malt fournit des sucres et des glucides tandis que la levure fournit des nutriments supplémentaires. Une fois la solution préparée, nous la pasteuriserons dans un autocuiseur pour nous assurer que tous les microbes rivaux sont éliminés.
Étape 1 : Ingrédients nécessaires :
- Plaques : 500 ml d’eau, 10 grammes de malt, 10 grammes d’agar, 1 gramme de levure.
Important : Scellez votre contenant mais ne serrez pas trop. Cela permet à toute pression ou condensation de s’échapper. Chauffez jusqu’à ébullition.
Étape 2 : Pendant que l’eau chauffe, mesurez vos ingrédients secs et ajoutez-les à la bouteille, au bocal ou au flacon approprié en suivant les recettes ci-dessus. Attendez que le mélange se combine complètement et chauffez jusqu’à la température désirée.
Étape 3 : Une fois votre solution prête, préparez l’autocuiseur. Vous pouvez utiliser n’importe quel autocuiseur que vous avez à la maison pour cette étape, mais assurez-vous de suivre les instructions du modèle particulier. Ensuite, prenez votre solution, vérifiez qu’elle est légèrement couverte, et placez-la à l’intérieur. Fermez correctement l’autocuiseur en vous assurant que chaque vis est équilibrée.
Étape 4 : Réglez un minuteur sur 30 minutes. Les autocuiseurs varient, alors assurez-vous de suivre les instructions pour vous assurer que vos plaques soient correctement stérilisées.
Étape 5 : Ce processus nécessite une hotte à flux laminaire ou un SAB (glove box). Stérilisez votre espace, y compris votre hotte à flux laminaire, vos gants et vos plaques. Retirez vos plaques MYA de l’autocuiseur (assurez-vous que la pression est tombée), et placez-les à l’intérieur de la hotte à flux laminaire ou la SAB. Faites attention car votre milieu peut être chaud.
Étape 6 : Une fois votre milieu prêt, il est temps de le verser. Si la bouteille est encore trop chaude pour être touchée, vous pouvez l’envelopper d’une serviette en papier stérile. Commencez à verser en partant du bas de la pile de boîtes de Pétri et remontez jusqu’au sommet afin de minimiser le temps pendant lequel l’intérieur de la plaque est exposé à l’air libre. Continuez ce processus jusqu’à ce que vous ayez utilisé toute la bouteille.
Étape 7 : Laissez refroidir vos plaques à l’intérieur de la hotte à flux laminaire. Une fois qu’elles sont solidifiées, scellez-les à l’intérieur d’un sac stérile et stockez-les à température ambiante. Vous pouvez aussi les conserver au réfrigérateur. La durée de conservation est d’environ deux mois.